PCR實驗是基于核酸水平的微觀樣本實驗，而這些微觀樣本對溫度、ph值等實驗環境非常敏感，在盡力維護樣本和保存環境的同時，防止核酸樣本污染也成為不可避免的話題。“易查不易察”，污染來的悄無聲息，今天給大家簡單介紹一下PCR實驗室的主要污染來源、實驗中如何避免和減少污染的可能性及實驗發生污染的應急處理方案。
一、PCR實驗室的污染來源
1、樣本間交叉污染：收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴外溢；不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實驗器具及耗材未及時消毒滅菌；不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復吹吸導致氣溶膠形成擴散，相互交叉污染。
2、實驗試劑污染：在試劑配制過程中，摻入核酸模板導致污染。
3、擴增產物污染：大量拷貝的產物泄漏或擴增后的PCR反應管意外開蓋。
4、克隆質粒污染：作為陽性質控品的克隆質粒外溢。
二、PCR實驗室的防污染方法
1、合理的實驗室分區：試劑準備區、樣本制備區和擴增區內的實驗用品，包括移液器等器具應專用，空氣、物品流向依次為：試劑準備區、樣本制備區、擴增區、產物分析區，不可逆行。
2、清潔的實驗用品：實驗室自配試劑（去離子水、緩沖液等）和所有使用器具在使用之前均應高壓滅菌或紫外殺菌。槍尖、反應管等實驗耗材應一次性使用。
三、正確的實驗操作
1、實驗應在超凈工作臺內進行，工作臺內應放置PCR專用的微量離心機、各量程的移液器和其他必須物品。
2、實驗的過程中選擇最合適尺寸的手套并能及時更換，在進出不同實驗區域或進行模板操作后都應更換實驗服、口罩、帽子及手套，以避免不同實驗區交叉污染。
3、裝有PCR試劑的反應管在打開之前應先瞬時離心，將管壁及管蓋上的液體離至管底，降低污染手套或加樣器的風險。謹慎開啟反應管，防止管內液體濺出或形成氣溶膠導致污染。
4、吸加試劑和模板的操作應嚴格按照規范要求進行，遵守“慢吸快打”原則，盡量一次性完成，忌多次抽吸，以避免氣溶膠產生的交叉污染。
5、PCR試劑建議小量分裝，以減少反復凍融、重復取樣次數。多樣本PCR反應時，先配制反應混合液分裝至反應管中，最后加入樣本核酸，請勿同時開蓋，盡量保證單人單管，實現完全閉管操作。
6、實驗試劑應與樣品和PCR產物分開保存，不應放于同處。
7、PCR擴增實驗完成后及時將反應管取出，用一次性手套將產物反應管包裹丟棄，保證管蓋緊閉。
四、規范的實驗設計：應遵循實驗室內部質量控制的相關規定，實驗中設立陽性對照、陰性對照和空白對照，全程質控實驗過程，驗證PCR反應的可靠性，并協助判斷擴增系統的可信性。
五、PCR實驗室的污染應急處理方法
1、若核酸樣本溢出：應立即用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒10%的次氯酸消毒劑，約30分鐘后，清除污染物品，再用次氯酸消毒劑擦拭，并用75%酒精噴灑，移動紫外車定點照射1小時。
2、其他不明情況污染：應暫停所有實驗操作，清理實驗室內所有物品，尋找污染來源。同時加大實驗室的通風，對實驗室內所有表面（臺面、地面及墻面） 進行消毒，用75%酒精空中噴霧。開啟紫外消毒裝置，延長紫外照射時間（4小時以上）。以上措施每日進行，直至污染消除；用新試劑及確認無污染的器材進行原污染項目的試劑空白檢測，連續3次均陰性后方可進行常規檢測。
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